产品解说

试剂盒内含

产品概述

  DNA含量分析在流式细胞检测中，占有相当大的比例。通过这种方法，研究者可以进行抗癌药物的毒性评估，并对恶性肿瘤细胞的预后效果及进展程度进行分析。在细胞周期检测中，DNA含量也同样作为重要的分析手段而被广泛应用。通过细胞DNA含量的测定，可计算各细胞周期的百分率，也可通过DNA片段化检测、DNA双染标记等方法检测细胞凋亡。

  Cell Cycle Assay Kit-PI/RNase Staining试剂盒，可快速完成细胞周期的分析，操作简便。本产品使用碘化丙啶 (PI) 作为DNA荧光染料，通过流式细胞术得到细胞周期中G0/G1，G2和S期细胞的比例。

所需的设备和材料

- 流式细胞仪（碘化丙啶PI:λex=535 nm，λem=617 nm）

- 37℃培养箱

- PBS缓冲液

- 1.5 ml微量管

- 100-1000 μl、20-200 μl、2-20 μl移液器

溶液制备

本产品在固定细胞及不细胞固定的情况下皆可使用。

配置Working solution (1 sample)

取500 μl Assay Buffer 后，分别加入25 μl PI Solution和2.5 μl RNase Solution。

＊工作液易遇光分解，请在使用前立即配置并用铝箔纸包裹避光保存。

配置好的工作液1天内用完。

基本操作

非固定细胞

1. 将细胞密度调整为1-5×10⁶cells/ml ^a)。

2. 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微型管中，在1,000×g离心3 min ^b)。

3. 去除上清液后加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞，在1,000×g离心3 min。

4. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。

5. 在4℃避光培养30 min。

6. 涡旋振荡使细胞分散，在37℃避光培养30 min。

7. 涡旋振荡使细胞分散，用尼龙筛网过滤，以去除样品中的细胞团块 ^c)。

8. 用流式细胞仪检测。

a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后，用PBS洗涤并离心收集细胞。

b) 根据不同的细胞种类，需适当调整转速与离心时间。

c) 样品处理后，剩余部分无法继续保存并使用。

固定细胞

1. 将细胞密度调整为1-5×10⁶cells/ml ^a)。

2. 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微型管中，在1,000×g 离心3 min。

3. 去除上清，并在细胞团中加入1 ml的-20℃保存的70%乙醇。

4. 涡旋振荡使细胞分散，在4℃下静置2 h ^b)。

5. 在1,000×g 离心3 min后，去除乙醇 ^c)。

6. 加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞，在1,000×g 离心3 min。

7. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。

8. 涡旋振荡使细胞分散，在37℃避光培养30 min。

9. 涡旋振荡使细胞分散，在4℃避光培养30 min。

10. 涡旋振荡使细胞分散，用尼龙筛网过滤，以去除样品中的细胞团块 ^d)。

11. 用流式细胞仪检测。

a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后，用PBS洗涤并离心收集细胞。

b) 根据不同的细胞种类，需适当调整固定时间。

c) 根据不同的细胞种类，需适当调整转速与离心时间。

d) 样品处理后可以在4℃以下保存并继续使用，但是保存时间长短与细胞种类有关。

常见问题Q&A

特点：

·日本原装进口试剂盒

·固定和不固定都可使用