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使用说明：
1.染色工作液的配制。
对于6、12、24、96孔板，每孔所需的染色工作液(Working Solution)的用量分别为1ml、500μl、200μl和50-100μl。根据样品数量，计算所需检测工作液的体积。以12孔板每孔500μl染色工作液的体系为例，参考下表配制检测工作液。
注1：染色工作液需现用现配，并一次性使用完毕，不可冻存。
注2：染色工作液中的Mito-Tracker Green (1000X)和Hoechst 33342 (1000X)的最终浓度需根据不同细胞系和实验体系通过预实验进行优化，上表中的用量为推荐用量，可以在0.2X-2X范围内摸索最佳工作浓度。
注3：本试剂盒中提供的Assay Buffer在一段时间内可以维持细胞的正常状态，并给细胞提供一定的营养，效果通常比PBS或HBSS更好，也可以使用Assay Buffer外的其它合适的缓冲液，如含血清完全培养液、无血清培养液、HBSS (C0218)或PBS。
2.贴壁细胞的线粒体染色。
a.当细胞在培养板或培养皿中培养至适当密度时，根据实验需要进行适当处理，然后去除细胞培养液，加入步骤1中配制好的Mito-Tracker Green染色工作液，37ºC孵育20-30分钟。注：最佳孵育时间需根据细胞类型进行适当的优化。
b.去除Mito-Tracker Green染色工作液，加入适当体积的Assay Buffer或细胞培养液。
c.用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到线粒体呈明亮的强荧光染色。如果染色效果欠佳，可以提高Mito-Tracker Green染色工作液浓度或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。
3.悬浮细胞的线粒体染色。
a.1000×g离心5分钟，弃上清，用Mito-Tracker Green染色工作液轻轻重悬细胞，37ºC孵育20-30分钟。
注：最佳孵育时间需根据细胞类型进行适当的优化。
b.孵育结束后，1000×g离心5分钟，弃上清，加入适当体积的Assay Buffer或细胞培养液。
c.用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪进行观察、分析或检测。
参考文献：
1.Yang R, Gao W, Wang Z, Jian H, Peng L, Phytomedicine. 2024. 122:155135.
1.染色工作液的配制。
对于6、12、24、96孔板，每孔所需的染色工作液(Working Solution)的用量分别为1ml、500μl、200μl和50-100μl。根据样品数量，计算所需检测工作液的体积。以12孔板每孔500μl染色工作液的体系为例，参考下表配制检测工作液。
| Samples | 1 | 5 | 10 | 20 |
| Mito-Tracker Green (1000X) | 0.5μl | 2.5μl | 5μl | 10μl |
| Hoechst 33342 (1000X) | 0.5μl | 2.5μl | 5μl | 10μl |
| Assay Buffer | 499μl | 2.495ml | 4.99ml | 9.98ml |
| Working Solution | 500μl | 2.5ml | 5ml | 10ml |
注2：染色工作液中的Mito-Tracker Green (1000X)和Hoechst 33342 (1000X)的最终浓度需根据不同细胞系和实验体系通过预实验进行优化，上表中的用量为推荐用量，可以在0.2X-2X范围内摸索最佳工作浓度。
注3：本试剂盒中提供的Assay Buffer在一段时间内可以维持细胞的正常状态，并给细胞提供一定的营养，效果通常比PBS或HBSS更好，也可以使用Assay Buffer外的其它合适的缓冲液，如含血清完全培养液、无血清培养液、HBSS (C0218)或PBS。
2.贴壁细胞的线粒体染色。
a.当细胞在培养板或培养皿中培养至适当密度时，根据实验需要进行适当处理，然后去除细胞培养液，加入步骤1中配制好的Mito-Tracker Green染色工作液，37ºC孵育20-30分钟。注：最佳孵育时间需根据细胞类型进行适当的优化。
b.去除Mito-Tracker Green染色工作液，加入适当体积的Assay Buffer或细胞培养液。
c.用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到线粒体呈明亮的强荧光染色。如果染色效果欠佳，可以提高Mito-Tracker Green染色工作液浓度或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。
3.悬浮细胞的线粒体染色。
a.1000×g离心5分钟，弃上清，用Mito-Tracker Green染色工作液轻轻重悬细胞，37ºC孵育20-30分钟。
注：最佳孵育时间需根据细胞类型进行适当的优化。
b.孵育结束后，1000×g离心5分钟，弃上清，加入适当体积的Assay Buffer或细胞培养液。
c.用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪进行观察、分析或检测。
参考文献：
1.Yang R, Gao W, Wang Z, Jian H, Peng L, Phytomedicine. 2024. 122:155135.