产品特性

得率高：多至20μg质粒DNA

适用范围广：高拷贝、低拷贝质粒均适用

速度快：无需乙醇，单管制备少于20min

安全：无酚、氯仿等有机试剂污染

两种纯化方法可供选择:  离心法和负压法

纯度高：适用于多种后续实验

产品应用

DNA测序

限制性酶切

细菌转化

文库构建

体外转录与翻译

分子文库构建

常规细胞转染

UElandy 质粒小量制备试剂盒采用SDS-碱裂解细菌细胞以及硅胶膜特异结合质粒DNA的原理，快速制备多至20ug质粒DNA。经过纯化的质粒适用于DNA测序、限制性酶切、细菌转化、文库构建、体外转录与翻译、分子文库构建及常规细胞转染等。

质粒提取常见问题与解答

1. 同样体积的新鲜菌液，为什么有些提取的质粒浓度高，而有些质粒的浓度低？这些情况应该如何处理? 

质粒提取高低的一个重要决定性因素是质粒载体的拷贝数，即质粒在一个大肠杆菌中的数目。对于低拷贝数的质粒，需要适当增加菌液的收集量，详情请参阅说明书。

2. 请问能否使用UElandy 质粒小量制备试剂盒提取BAC之类的大质粒？

不建议使用。

3. 使用UElandy 质粒小量制备试剂盒，加入Buffer S3后沉淀不明显。请问是什么原因?

一种可能是菌体太少，所以没有明显沉淀，建议增加菌体使用量。另外一种可能是加入Buffer S3后没有充分混匀，建议加入Buffer S1后完全重悬菌体，加入Buffer S2后轻轻混匀，使菌体完全裂解，加入Buffer S3后充分混匀。

4. 使用UElandy 质粒大量制备试剂盒时，在DNA结合/洗涤步骤中能否使用离心法？

可以，使用与离心机配套的离心管可以进行离心。

5. 使用UElandy质粒中量制备试剂盒时，在DNA结合/洗涤步骤中能否使用离心法?

不建议使用。UElandy质粒中量制备试剂盒中的质粒制备管不能与常规的15ml，50ml离心管配套，所以无法使用。您可以通过使用负压装置来解决这一问题。如果无法取得相配套的负压装置，可以尝试手推过滤器的方式进行，但这样的操作容易引起污染。

6. UElandy质粒小量制备试剂盒中的制备管能否与UElandy DNA凝胶回收试剂盒中的制备管替换使用？

不能。两种制备管都是基于硅胶膜技术，但是各自的制备管只有与各自试剂盒中的试剂盒配套才能达到最佳效果。质粒小量试剂盒结合能力最大为20μg，最长的质粒片段为50kb。胶回收试剂盒最大结合能力为8μg，最长的DNA结合片段为10kb。

7. 我提取的质粒为什么会有基因组条带？

菌体在裂解和中和过程中如果操作过于剧烈就容易引起基因组污染。加入Buffer S2后要轻柔混匀，加入Buffer S3后混合均匀。如果发现裂解物在操作过程中过于黏稠，需要适当降低菌体的用量。

8. 我提取的质粒在电泳图片上看，有一条紧挨着主带的小条带请问这是什么原因？如何判定它是否是杂带？

那条带很有可能就是变性条带。如果在加入Buffer S2后没有及时混匀菌体，会导致菌体局部碱性过强，破坏质粒的结构，在加入Buffer S3后质粒无法完全复性，就产生了这样的变性条带。

检测的方式是通过酶切检测，如果这条带在酶切后依然存在，则是变性条带，如果酶切后消失，则可能是质粒的不同状态。

9. 我提取的质粒有明显的RNA污染，请问是什么原因？

可能有以下两种可能：

1、RNase A活力下降。Buffer S1在加入RNase A后要保存在4°C冰箱。如果室温放置，RNase A活力会下降，导致RNA 污染。

2、菌体过量。如果使用的菌体量过多，也可能导致RNA污染。适当减少菌体的用量。

10. 质粒得率很低，请问是什么原因？

质粒低的可能因素很多，以下是几种可能原因：

1、菌体过量，导致菌体不能完全裂解和中和，最终导致质粒得率低。

2、Buffer W2中未按瓶子上得标注体积加入乙醇。

3、菌体老化，影响提取的效果。建议对菌液进行划板培养，筛选新鲜克隆。

11. 请问Eluent Buffer的配方是什么？对于DNA测序有没有影响？

Eluent Buffer 的配方是2.5mM Tris-HCl，pH8.0。质粒在这样的溶液中能够稳定保存，而且测序不受影响。